[Campbell Biology P.471] Selon la figure 20.8 et sa description, quelle est la séquence qui ... | Practice Question
Selon la figure 20.8 et sa description, quelle est la séquence qui décrit le mieux le processus de création d'un plasmide d'ADN recombinant et de sélection des cellules hôtes transformées?
A: Des fragments d'ADN (gène d'intérêt) sont obtenus ; le vecteur de clonage est coupé avec une enzyme de restriction ; les fragments et le vecteur sont ligaturés ; les plasmides recombinants sont ajoutés aux cellules hôtes ; les cellules sont traitées avec un antibiotique.
B: Le vecteur de clonage est coupé ; les cellules hôtes sont traitées avec un antibiotique ; les fragments d'ADN sont obtenus ; la ligation a lieu ; les plasmides recombinants sont ajoutés aux cellules.
C: Les plasmides recombinants sont formés par ligation ; les fragments d'ADN sont obtenus par PCR ; le vecteur de clonage est préparé ; les cellules hôtes sont sélectionnées.
D: Le vecteur de clonage est ligaturé avec des fragments d'ADN ; les cellules hôtes sont mélangées avec de l'ADN recombinant ; les amorces PCR sont conçues ; les cellules sont cultivées sur des milieux antibiotiques.
Explanation
La figure 20.8 illustre le processus : d'abord, des amorces PCR sont utilisées pour obtenir des fragments d'ADN avec des sites de restriction. Simultanément, le vecteur de clonage est coupé avec la même enzyme de restriction. Ensuite, les fragments et le vecteur sont mélangés et ligaturés pour former des plasmides d'ADN recombinant. Ces plasmides sont ajoutés à des cellules hôtes bactériennes, et enfin, les cellules sont traitées avec un antibiotique. Seules les cellules qui ont intégré le plasmide contenant un gène de résistance aux antibiotiques survivront, offrant ainsi un mécanisme de sélection.